Vol. 33 Núm. 1 (2017)
Artículos originales

Estandarización y validación de la prueba de pcr anidada para el diagnóstico de especies del género xyleborus (coleoptera: curculionidae: scolytinae)

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  • María Elena Sosa-Castillo,
  • Joel Lara Reyna,
  • Laura Delia Ortega Arenas,
  • Alfonsina Judith Hernández
María Elena Sosa-Castillo
Colegio de Postgraduados, Campus Montecillo
Biografía
Joel Lara Reyna
Colegio de Postgraduados, Campus Campeche
Laura Delia Ortega Arenas
Colegio de Postgraduados, Campus Montecillo
Biografía
Alfonsina Judith Hernández
Colegio de Postgraduados, Campus Montecillo
Biografía
DOI: https://doi.org/10.21829/azm.2017.3311008

Publicado 23-05-2017

Palabras clave

  • Escarabajos ambrosiales,
  • identificación molecular,
  • diagnóstico,
  • gen CO1

Cómo citar

Sosa-Castillo, M. E., Lara Reyna, J., Ortega Arenas, L. D., & Judith Hernández, A. (2017). Estandarización y validación de la prueba de pcr anidada para el diagnóstico de especies del género xyleborus (coleoptera: curculionidae: scolytinae). ACTA ZOOLÓGICA MEXICANA (N.S.), 33(1), 18–26. https://doi.org/10.21829/azm.2017.3311008

Derechos de autor 2017 ACTA ZOOLÓGICA MEXICANA (N.S.)

Creative Commons License

Esta obra está bajo una licencia internacional Creative Commons Atribución-NoComercial-CompartirIgual 4.0.

Resumen

En este estudio se estandarizó y validó la técnica de PCR anidada para la detección rápida, sensible y confiable de especies del género Xyleborus mediante el uso de los primers externos CI-J-2183 y TL2-N-3014 e internos J2210 y N2739, que amplifican una banda de 500 pb de la región del gen mitocondrial Citocromo Oxidasa subunidad 1(CO1). Asimismo, se realizó la extracción de ADN de 26 ejemplares de Xyleborus con el kit Qiagen DNeasy® mericom Food (DMF), no reportado previamente su uso para su aplicación en insectos, que resultó en ADN suficiente y de alta calidad para reacciones de amplificación por PCR. El método permitió procesar un solo insecto por extracción, y obtener material genético de muestras conservadas en alcohol de hasta ocho años de antigüedad. El límite de detección se definió hasta una concentración de 780 pg/ul. Se optimizóla PCR en un volumen final de 15 uL sin comprometer calidad de la amplificación. La técnica estandarizada permitió la obtención de ADN de calidad, lo que aseguró alta reproducibilidad y sensibilidad en la detección de especies de Xyleborus y la secuenciación parcial del gen CO1 para las siete especies estudiadas; las secuencias consenso fueron analizadas por homología y depositadas en el GenBank.

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